INSTITUTO TECNOLÓGICO
DE CD. ALTAMIRANO GRO
LIC: BIOLOGÍA
ASIGNATURA:
MICOLOGIA
VALORACIÓN DEL EFECTO
ANTAGÓNICO DE CEPAS FÚNGICAS NATIVAS EN EL CULTIVO DE RÁBANO BAJO CONDICIONES
DE INVERNADERO
NOMBRE DE INTEGRANTES
DE EQUIPO
GISELLE MOLINA VALENZUELA
ERIKA FERNANDA
REYNOSO HERNANDEZ
MAYRA
ESPERANZA BRAVO GARCIA
SEMESTRE
Y GRUPO: 3 ºSEMESTRE “A”
NOMBRE DEL PROFESOR: JAZMIN CORTEZ
SARABIA
CD.ALTAMIRANO,
GRO. 04/OBTUBRE/2012
RESUMEN
El presente
trabajo evaluara la capacidad antagónica
de cepas de hongos, que afectan a un cultivo
de Rhizoctonia solani, mediante enfrentamientos in vitro. Tanto las cepas patógenas como las
antagonistas serán aisladas del material
vegetativo de plantas maduras de rábano. Recolectadas en ciudad Altamirano, Guerrero.
De las cepas probadas, algunas de ellas contribuirán en la inhibición del
crecimiento de los patógenos, Los daños causados a las estructuras de los
patógenos por los hongos antagónicos variaran según la cepa del antagonista.
COLECTA EN CAMPO DE MUESTRAS VEGETALES
METODOLOGÍA
SUGERENCIAS: al momento de tomar las muestras,
estas deberán etiquetarse con los datos necesarios para guardarse en bolsas de
plástico e inmediatamente colocarlas en una hielera.
2.
Procesar las muestras en el laboratorio:
-Cortar y macerar muestras vegetales
-Siembra en placas
de Petri con medio de cultivo de Agar Papa Dextrosa.
-Incubación durante 48 hrs a 28°C.
-Aislamiento y purificación de cepas fúngicas.
3. Pruebas de patogenecidad:
-Siembra de rábano (con suelo estéril y recipientes de plásticos con
capacidad para 2 L)
-Evaluar sintomatología y comportamiento del fitopatógeno: intensidad de
infección, patogenecidad y prevalencia.
4. Taxonomía de cepa (s) Fitopatógenas:
-Determinar a través de pruebas
macromorfológicas y microscópicas las características de las cepas.
-Aplicar las claves de identificación para hongos Fitopatógenos e
identificar.
Segunda etapa:
MUESTREO EN CAMPO
PARA EL AISLAMIENTO DE POSIBLES CEPAS ANTAGONICAS
-Muestreo en campo para toma de muestras de suelo rizosférico de plantas
hortícolas.
SUGERENCIAS: al momento de tomar las muestras, estas deberán etiquetarse
con los datos necesarios para guardarse en bolsas de plástico e inmediatamente
colocarlas en una hielera.
-Procesar en el laboratorio: Realizar la siembra en medio PDA, aislarlas
y purificar.
-Pruebas de confrontamiento: confrontar las cepas Fitopatógenas con
posibles cepas antagónicas de hongos y/o bacterias.
-Evaluar el grado de inhibición de la cepa antagónica hacia el
fitopatógeno.
-Seleccionar las que dieron positivo al
antagonismo.
-Purificación de cepas antagónicas e identificación taxonómica.
-Confrontación In vitro de cepas antagónicas vs Fitopatógenas para la
evolución de antagonismo en medio de cultivo PDA.
Tercera etapa:
EVALUACIÓN EN INVERNADERO DE LA EFECTIVIDAD E
INFECTIVIDAD DE CEPAS ANTAGÓNICAS VS FITOPATÓGENOS
-Esterilización de sustrato y recipientes (con capacidad de 2kg)
-Desinfección de semillas de rábano con hipoclorito de sodio al 10%
durante 10 min.
-Infección con hongo fitopatógeno
-Inoculación con hongo antagónico
-Evaluación diaria de la evolución del tratamiento
-Cosecha del experimento y evaluación de las variables evaluadas
blogspot(2012)micología. Fecha de consulta 5/10/2012.
Material
Cajas de petri esterilizadas
Agua estéril
Hojas
Semillero
Termómetro
Hibernadero
Algodón
Gasas
Medio de cultivo PDA
Balanza analítica
Semillas
Esterilidad del medio
Ph
Condiciones adecuadas de humedad
BIOTECBET(2008) protocolo para la preparación de medios de
cultivos. fecha de consulta (05/10/2012), no de visitantes 15,675
Danival(2000)medios de cultivo en microbiología. Fecha de
consulta (05/10/2012), no de visitantes 800
Palabras claves: biocontrol,
Invernadero, Cajas de petri esterilizadas, semillas de rábano, fitopatogeno, cepas fúngicas, inoculación, antagonismo.
INTRODUCCIÓN
1.0. Dentro
de los múltiples factores que afectan la producción de cultivos hortícolas se
encuentra la proliferación de hongos filamentosos causantes de enfermedades
para las plantas (Sánchez, 1998). Como ejemplo, la enfermedad Ceniza” u oidio de las cucurbitáceas producida por Sphaerotheca
fuliginea , este tipo de hongo produce que el
cultivo presente manchas pulverulentas de color blanco en la superficie de las
hojas (haz y envés) que van cubriendo todo el aparato vegetativo llegando a
invadir la hoja entera, también afecta a tallos y peciolos e incluso frutos en
ataques muy fuertes. Las hojas y tallos atacados se vuelven de color
amarillento y se secan. Las malas hierbas y otros cultivos de cucurbitáceas,
así como restos de cultivos serían las fuentes de inóculo y el viento es el
encargado de transportar las esporas y dispersar la enfermedad. Las temperaturas
se sitúan en un margen de 10-35 ºC, con el óptimo alrededor de 26 ºC. La
humedad relativa óptima es del 70 %. (Anónimo) El control biológico, representa
una estrategia innovadora para el manejo de enfermedades de plantas de
importancia agrícola (Heredia y Delgadillo, 2000), que se basa en la capacidad
de un organismo para inhibir el crecimiento o destruir a un fitopatógeno
(Whipps y Lumsden, 2001). En el suelo existen diversos microorganismos con
capacidad antagónica hacia microorganismos fitopatógenos, pero el más estudiado
es Trichoderma, debido a su fácil y rápido
crecimiento además de sus características de micoparasitar a otros hongos
(Howell y Stipanovic, 1995). Sin embargo, existen otras especies fúngicas que
potencialmente pueden inhibir o limitar el crecimiento de los patógenos (Paul,
1999a; 1999b), como es el caso de algunas especies de Aspergillus (Alfonso et al., 1992; Lourenço et al., 2006; Suárez–Estrella et al.,
2007).
1.1. Botrytis:
Las
especies de Botrytis constituyen uno de los grupos de patógenos de
plantas y saprófitos más extendido geográficamente. Se encuentran allá
dondequiera que crezcancosechas huésped, desde zonas frías como Alaska o
Canadá, hasta áreas subtropicalescomo Egipto, ocasionando importantes pérdidas
en los cultivos comerciales.
Figura 1.1. Efecto producido por
Botrytis cinerea en diferentes cultivos.
El
fitopatógeno Botrytis cinerea es el agente causante de la enfermedad
conocidacomo "podredumbre gris", cuyo nombre se debe a que produce un
moho grispulverulento sobre los cultivos que infecta (figura 1.2).
La
podredumbre gris es la enfermedad más extendida y económicamente másimportante
de las que afectan a un amplio número de frutas y hortalizas, especialmentelas
uvas, reduciendo su calidad y cantidad.4 Los vinos producidos por uvas
infectadas tienen menor calidad debido a la disminución de monosacáridos
(glucosa, fructosa) y a la acumulación de metabolitos (glicerol, ácido
glucónico) y de enzimas que catalizan la oxidación de compuestos fenólicos.
Estos vinos tampoco son recomendables para envejecer, ya que son susceptibles a
la oxidación y a la contaminación bacteriana
Figura 1.2. “Podredumbre gris” causada
Por Botrytis cinerea en un racimo de uvas.
Aunque
B. cinerea causa severos daños en la producción de vinos
(podredumbregris), también, bajo ciertas circunstancias, puede dar vinos de
excelente calidad(“podredumbre noble”), tales como el Sauternes (Francia),
Tokays (Hungría) y Trockenbeerenauslesen (Alemania, Austria). El beneficio
radica en que se consumen proporcionalmente mucho más los ácidos que los
azúcares, obteniéndose vinos suaves, dulces, con cuerpo y agradable .La importancia
de las infecciones producidas por el hongo B. cinerea requiere el empleo
intensivo de fungicidas. Las pérdidas económicas ocasionadas por este
fitopatógeno se estiman en 100 millones de euros.Por ello, el control racional
de la enfermedad producida por B. cinerea es uno de los mayores retos a
los que se enfrenta la industria agroalimentaria. Su gran adaptabilidad a
condiciones extremas y su capacidad para desarrollar resistencia a los
fungicidas6 hacen de B. cinerea uno de los hongos más temidos por los
agricultores.Botrytis cinerea es un parásito que, de forma inicial, se
establece en las zonas más debilitadas y dañadas de la planta huésped para
posteriormente extenderse al resto dela planta, aunque en algunos casos puede
atacar plantas infectadas por otro tipo de plagas o patógenos. La infección por
B. cinerea tiene lugar mediante anclaje (apresorio)de los llamados tubos
germinativos (ramificación de hifas) sobre el tejido a infectar. El proceso de
invasión va acompañado de la secreción de sustancias que son las encargadas de
destruir el tejido vegetal de la planta huésped.
El presente trabajo evaluara
el grado de antagonismo de diferentes cepas de en condiciones in
vitro, aislados de
la zona productora, así como también nos ayudara a identificar el daño que
causan los antagonistas en las estructuras de los patógenos.
2.0 Objetivo general
Determinar
bajo pruebas invitro y en invernadero la capacidad antagónica de cepas fúngicas
nativas de la región de tierra caliente C. Gro, en el cultivo de rábano.
2.1 Objetivos específicos
-
Obtener conocimientos acerca de
esta forma de biocontrol
-
conocer la presencia y
participación de los hongos en la inhibición de los fitopatógenos
3.0 JUSTIFICACIÓN
El
incremento de enfermedades en plantas, causadas por un gran numero de hongos
fitopatogenos ha obligado a los agricultores a la aplicación de grandes
cantidades de fungicidas e insecticidas químicos durante décadas y nosotros
como futuros biólogos tenemos que preocuparnos por estos hechos.
La
utilización de fungicidas químicos durante décadas para el control de
enfermedades en cultivos agrícolas ha hecho inminente la búsqueda de
alternativas amigables, que contribuyan a minimizar el impacto negativo sobre
el medio ambiente. El manejo biológico y controlado de los cultivos, se
presenta como una alternativa ecológica y eficaz frente a los numerosos y
crecientes problemas causados por microorganismos patógenos presentes en
nuestro agro ecosistema.los hongos biocontroladores ofrecen buenas
posibilidades como antagonista de hongos patógenos de plantas, actuando como
hiperparásitos competitivos, de la misma manera debido a su ubicuidad,
facilidad de aislamiento y cultivo,
crecimiento rápido en gran numero de
sustratos está presente en todos los suelos agrícolas; sumando a la resistencia
y persistencia de estos hongos en cultivos y cosechas, promueve una continua y progresiva investigación y estudios en de control biológico de enfermedades en
plantas.
En
este contexto el presente trabajo
trabajo evaluara la capacidad biocontroladora de algunos aislamientos
nativos, frente al hongo FITOPATOGENO R.
solani bajo condiciones de invernadero. Los
resultados del presente estudio permitirán apoyar el manejo integrado de plagas
limpias y amigables en nuestra región.
4.0 MARCO TEÓRICO
El
desarrollo y aplicación de agentes de control biológico de plagas adquiere una
importancia relevante como una alternativa en el desarrollo de una agricultura sostenible que preserve los recursos naturales y el medio
ambiente para
las futuras generaciones. La aplicación controlada en agroecosistemas de
organismos vivos o sus metabolitos para el control
de plagas y enfermedades, implica el mejoramiento de los cultivos, al
proteger las plantas del deterioro producido por agentes
fitopatógenos .
En
la naturaleza, los hongos entomopatógenos pueden eliminar
o mantener las plagas en niveles que no ocasionan daños económicos a los
cultivos (Azevedo J.L. y Melo I.S. 1998) Estos hongos se encuentran en
rastrojos de cultivos, estiércol, en el suelo, las plantas; logrando un buen desarrollo en
lugares frescos, húmedos y con poco sol. Constituyen, además, el grupo de mayor importancia en el control biológico
de insectos plagas. Prácticamente, todos los insectos son susceptibles a
algunas de las enfermedades causadas por hongos .
Se
conocen aproximadamente 100 géneros y 700 especies de hongos entomopatógenos.
Entre los géneros más importantes están: Metarhizium,
Beauveria, Aschersonia, Entomophthora, Zoophthora, Erynia, Eryniopsis,
Akanthomyces, Fusarium, Hirsutella, Hymenostilbe, Paecelomyces yVerticillium .
Para
utilizar hongos entomopatógenos como insecticidas deben producirse cantidades
masivas del hongo, el cual debe mantener su capacidad infectiva por un período
de tiempo considerable. Los hongos se han reproducido
para su uso como agentes biológicos de plagas desde hace 100 años, para lo cual
se ha utilizado diferentes métodos de reproducción. Entre ellos, el uso de sustratos como
arroz, trigo y medios líquidos mediante técnicas más sofisticadas
Literatura
citada
Anónimo
Alfonso C., F. del Amo, O.M.
Nuero, F. Reyes, 1992. Physiological and biochemical studies on Fusarium oxysporumf. sp. lycopersici race 2 for its biocontrol by
nonpathogenic fungi. FEMS Microbiology Letters
99:169–174.
Howell, C.R., B.D. Stipanovic, D.R. Lumsden, 1993.
Antibiotic production by strains of Gliocladium
virens and its relation to
the biocontrol of cotton seedling disease. Biocontrol Science Technology 3 :
435–441.
Lourenço Jr., V., L.A. Maffia, R. da Silva–Romeiro,
E.S.G. Mizubuti, 2006. Biocontrol of tomato late blight with the combination of
epiphytic antagonists and rhizobacteria. Biological
Control 38 : 33 1–340.
Sánchez, P.J.R., 1998.
Variabilidad morfológica y patogénica de cuatro aislamientos de Sclerotium cepivorumBerk. Tesis
de Maestría. Instituto de Fitopatología. Colegio de Postgraduados. Montecillo. 72 p.
Suárez–Estrella, F., C.
Vargas–García, M.J. López, C. Capel, J. Moreno, 2007. Antagonistic activity
of bacteria and fungi from horticultural compost against Fusarium oxysporum f. sp. melonis. Crop Protection 26:26–53.
Whipps, J.M., D.R. Lumsden, 2001. Commercial use of
fungi as plant disease biological control agents: Status and prospects. In:
Butt, T.M., C.W. Jackson, N. Magan (eds.), Fungi as biocontrol agents:
Progress, problems and potentials. CABI Publishing. Wallingford. pp
9–22.
BIOTECBET(2008)
protocolo para la preparación de medios de cultivos. fecha de consulta
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Danival(2000)medios de cultivo en microbiología. Fecha de consulta
(05/10/2012), no de visitantes 800
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